Studiu IHC - ajutor în descifrarea biologia cancerului de san

În ciuda faptului că tot mai multe clinici încep să utilizeze tehnici de fenotiparea genetica a tumorilor de studiu IHC rămâne în prezent principalul instrument în descifrarea biologia cancerului de san, in estimarea dezvoltarea sa viitoare, „predictor“ a răspunsului tumoral la tratament planificat.

În acest articol veți afla ce imunohistochimice (IHC) de studiu, semnificația IHC are cancer de san.

Histochimie (secțiuni în colorație histologie)

Înainte de patolog (morfologia) începe sub țesutul mamar porțiune microscop obținut din biopsii, este necesar pentru vopsirea coloranților sale speciale.

coloranți histochimice aplicate pe secțiune subțire a unui site de țesut pentru a vedea la microscop, celulele care sunt prezente acolo, dispunerea lor în raport cu altele (structura tisulară). microscopie Lumina este o metodă de rutină pentru a studia secțiunile de țesut colorate, utilizate pe scara larga in diagnosticul de cancer de san. Cele mai frecvente secțiuni de țesut de colorare folosind:

• Hematoxilină - ea colorează nucleul celulei într-o culoare albastru închis;
• Eozină - ceea ce face citoplasma celulelor roz. Partajarea-le cu hematoxilină-eozină numit colorare.

Ce este un imunohistochimie (IHC)

Patolog - un medic, care a studiat mult timp la Universitatea de Medicina, să știe cum să folosească un microscop pentru a distinge pătat celulele canceroase secțiuni din țesutul normal. Diagnostic De obicei (patologie benigne sau maligne este), este suficient să se ia în considerare în cadrul unei secțiuni de țesut microscopice colorate cu hematoxilină și eozină. Dar, uneori, acest lucru nu este suficient. În această situație, ajutorul vine imunohistochimie, care este o identificare morfologică a celulelor și a țesuturilor adaugă o componentă imunologică.

Metoda imunohistochimia (IHC) detectarea complemente morfologice ale celulelor și țesuturilor folosind anticorpi față de antigene cunoscute, care sunt specifice pentru anumite tipuri de celule sau componente celulare. Localizarea acestor anticorpi pot fi observate folosind microscopie optică, deoarece anticorpii conțin vizual recunosc tag-ul.

Prima analiză tehnica imunohistochimică a cancerului de sân, utilizând anticorpii cu etichete fluorescente atașate, care a necesitat utilizarea de microscop fluorescent special, permițând localizarea acestor anticorpi vezi tăiat în țesutul mamar.

De-a lungul ultimilor 30 de ani a simplifica tehnica care este utilizat pentru cercetarea IHC cancerului de san, prin utilizarea de anticorpi specifici (anticorp monoclonal) cu o etichetă enzimatică. Aceasta, la rândul său, a permis utilizarea de microscopie optică cu cercetarea cancerului mamar imunohistochimică, care este mult mai ieftin și, prin urmare, mai accesibile. Cu toate acestea, elementele radioactive (peroxidaza, fosfataza alcalină și fluoresceină), fără de care, uneori, nu necesita tehnici speciale și este încă utilizat pe scară largă.

Necesitatea de a folosi imunohistochimie in cancerul de san, de control al calității și interpretarea rezultatelor trebuie să fie monitorizate Departamentul de Patologie. Este important ca datele obținute la decodificare studiului IHC utilizat numai în legătură cu analiza morfologică a țesutului mamar, obținut prin vopsirea cu hematoxilină și eozină.

Astăzi imunohistochimie in cancerul de san este cea mai metodă de rutină în laboratoare morfologice (histopatologice) și utilizate pentru diagnostic și prognostic scop, ca predictivă (predictivă) se comportă ca indicator cum ar fi cancerul de san in viitor.

Diagnosticul de cancer de san si IHC

Când patologul vede sub materialul microscop biopsie, el se confruntă cu două sarcini de diagnosticare de bază: a determina originea celulelor tumorale, în cazul în care acestea au fost (în canale, în lobuli, sau în alte părți ale sânului) și confirma sau infirma invazia lor de tesut din apropiere.

markeri IHC de diagnostic utilizat pentru cancerul de san

Din primele zile de utilizare in oncologie IHC a fost efectuat o cautare pentru tehnici noi și îmbunătățite folosesc anticorpi existenți care ar putea identifica antigene celule cu specificitate și sensibilitate. Următoarele markeri IHC sunt acum utilizate pe scară largă pentru a clarifica diagnosticul histopatologic al cancerului de san:

citokeratinele

• CK5, CK10, CK14 și CK17 sunt strat bazal cytokeratin a epiteliului, celulele mioepiteliale exprimat.
• CK5 / 6 sau „citokeratinele bazale“ ajuta la identificarea celulelor normale mioepiteliale de san ca si laminar (secretoare).
• 34 12: anticorpul ajută să recunoască cytokeratins 1, 5, 10 și 14.

Markerii musculaturii netede

• H-caldesmonul. Acesta poate fi găsit numai în celulele mioepiteliale ductale de san, deci are o specificitate mare.
• actina mușchiului neted (SMA). Acest anticorp ajută la detectarea actină în specificitate redusă mikrofilamentah-, deoarece SMA este detectat în fibroblaste (în țesuturi care au fost regenerat).
• mușchiul neted al miozinei lanț greu (SMMHC) - o componentă structurală în buna miozina musculare izoformei SM2. Exprimat celulele de san mioepiteliale, are o sensibilitate ridicată și specificitate, ca SMMHC prezentă numai în celulele mioepiteliale dispuse in conducte si lobuli ale glandei mamare, dar nu și în fibroblastele țesutului conjunctiv al glandei.
• Calponin - o polipeptidă de 34 kDa, modulează activitatea actomiozin. sensibilitate bună, dar este prezent în fibroblastele mamare ale țesutului conjunctiv.
• P63-p53 omoloagă - markerul nuclear este celulele mioepiteliale foarte sensibile.
• CALLA: Endopeptid, care este exprimat în celulele mioepiteliale.
• P-cadherin - celula molecula de adeziune cu sensibilitate ridicată la celulele mioepiteliale ale tesutului mamar normal. Ea nu reacționează cu fibroblaste.

alți markeri

• E-cadherin - molecula de adeziune celulară. Este folosit pentru a distinge carcinomul ductal „în Suti“ (DCIS) din lobular. Carcinomul „în Suti“ (LCIS) - DCIS, identificat de obicei prin colorarea membranei, spre deosebire de LCIS, în care nu este.
• Markerii de melanom: S100, Melan-A, HMB45.
• markerii limfocitului: CD20, LCA, CD15, CD30.
• Markerii endoteliale vasculare: CD31, CD34, Factor VIII, d2-40 (podoplanin).
• markeri de proliferare celulară: Ki67, MIB-1, PF3.
• markeri ai apoptozei: Bcl-2 și Bax, Bcl-X.

Exemple de utilizare a IHC pentru a rezolva problemele întâlnite în determinarea patologiei de san

Există multe situații în care imunohistochimie contribuie la formularea diagnosticului histopatologic în patologia finală de san:

• Colorarea membranei celulare e-cadherin elimină neoplazie lobulare (ALH) și LCIS. Lipsa membranei celulare de colorare favorizează tumori lobulare.
• hiperplazie epitelială normală, atipii epitelială sau cutare sau cutare DCIS. În hiperplazia benignă poate detecta reactivitatea la CK5 / 6 și CK14, în timp ce cu hiperplazie atipică și DCIS nu.

Acest carcinom de micro-invazive sau altceva? markerii celulelor mioepiteliale Application este esențială pentru a determina dacă este sau nu o invazie micro-carcinom (invazia stratului laminar în celulele mioepiteliale). Reactivitatea fibroblaști, decalajul în colorarea celulelor, colorarea mioepiteliale a celulelor musculare netede vasculare poate provoca dificultăți în interpretarea modelului observate la microscop. Doi markeri de celule mioepiteliale utilizate în această situație, de exemplu, p63 și SMMHC sau ASMA sau calponin.

Ce markeri IHC sunt utilizate în panourile de diagnostic in patologia sanului

Un set de markeri (panou de diagnosticare), care este utilizat în studiile de IHC in cancerul de san, depinde în mare măsură de dotarea laboratorului în care să efectueze imunohistochimie și experiența medicului care o conduce. Mai jos sunt recomandări care panoul IHC ar trebui sa fie folosite la patologia de san, cu condiția ca unul dintre clinici:

• Miozină lanțurile grele ale musculaturii netede (SMMHC) sau calponin - markeri sensibili și specifici celulelor mioepiteliale citoplasmatici;
• actina mușchiului neted poate fi folosit, dar încă în interpretarea ar trebui să se țină seama de faptul că este prezent în fibroblaste (inflamație și cicatrice);
• P63 este un marker sensibil și specific la celulele mioepiteliale nuclee de colorare, dar pot fi discontinue. Utilizarea unui marker pentru celulele mioepiteliale citoplasmatici cum ar fi SMMHC sau calponin, trebuie utilizat pentru a evita orice probleme în interpretarea imaginilor obținute.

Atunci când încearcă să determine prezența sau absența celulelor mioepiteliale și p63 trebuie utilizat SMMHC sau calponin.

Rolul imunohistochimie în definiția „anticipative“ și „factori de predictie“ in cancerul de san

Factorii prognostici furnizează informații cu privire la comportamentul posibil al cancerului de san la momentul diagnosticului și sunt independente de terapie. Aceasta este, cu ajutorul ei poti judeca modul în care aceasta va progresa rapid și a cancerului, respectiv, în funcție de acesta pentru a decide cât de mult și de tratament de preferință în fiecare situație.

La rândul său, „predictive“ (prezice) factori furnizează informații care oferă o indicație a probabilității de răspuns tumoral la un anumit tratament. În ciuda faptului că factorii de prognostic si predictie poate organiza separat în diagnosticul și clasificarea cancerului de san mai multe ori acestea sunt atat de prognostic si de predictie.

De exemplu, prezența de exprimare înaltă HER2. În cazul în care cancerul de san HER2 pozitiv (un număr mare de proteine ​​HER2 în tumoare), este nevoie de un agresiv, cu metastaze precoce la organe aflate la distanță. Dar, în cazul în care tumora conține o cantitate mică de această proteină (cancer de san HER2 negativ), acesta nu va răspunde la utilizarea medicamentului Herceptin vizate.

„bazale“ markeri IHC

Există o diviziune cancerul de sân în funcție de faptul care genele exprima celulele sale (profil expresia genelor). Tumorile profilului care este caracteristic pentru bazală sau celulele mioepiteliale ale san normale, va arăta prezența markerilor „bazale“. Astfel de tumori au prognostic saraci. In cele mai multe dintre aceste tumori „bazale“ complet absentă ER, PR (receptori pentru estrogen si progesteron) si proteina HER2. Ei metastaza frecvent la creier, plămâni.

Astăzi nu există un consens cu privire la profilul imunohistochimică (IHC markeri care ar trebui să fie aplicate), care să definească în mod clar „bazale“ crabi. Aceste tumori cu prognostic slab include așa-numitul „cancer de san triplu negativ“ in care nu ER, PR si HER2, dar și-a exprimat cytokeratins bazale 5/6 și 14, receptorul factorului de creștere epidermal (EGFR) și C-KIT. Ele pot exprima, de asemenea, P-caderină și de multe ori p63.

Există asemănări între „bazale“ cancer de san si de cancer, care sunt detectate la femeile cu o mutatie BRCA1.

EGFR este exprimat de multe ori în cazurile de cancer „bazale“, astfel incat pacientii cu astfel de tumori ar putea beneficia în tratamentul inhibitorilor EGFR.

markeri IHC de proliferare (rata de creștere a tumorii)

Numărul sau procentul de celule mitotice în mitoză, a fost mult timp considerat un morfologică „biomarker“ prognosticul cancerului. Există o serie de markeri IHC care prezintă activitate de proliferare a celulelor (număr de mitoze):

• Ki67 - un antigen care este exprimat în nucleele celulelor în toate fazele ciclului celular și este un marker util al proliferării celulare;
• MIB1 - un anticorp care reacționează cu Ki-67 în țesut sau parafină fixă ​​formol;
• PF3.

markeri IHC ai apoptozei

Apoptoza, sau „sinucidere celulară programată„este un biomarker tumori agresive. Proteinele apoptotice pot fi identificate prin IHC:

• Bcl-2;
• Bax;
• Bel-.

Alți markeri „anticipative“

• p53. Mutatii genei p53 supresoare tumorale (TP53) detectate în 20-30% din cazurile de cancer de san. Aceste mutații genetice sunt mai frecvente la femeile cu sindroame ereditare de cancer de san decat femeile cu cancer sporadice. Pentru pacienții cu predispoziție genetică la cancer de san poate fi recomandată testarea p53. Detectarea mutatii in p53 este, de asemenea, considerată ca un posibil predictor al răspunsului cancerului mamar la chimioterapie, dar detectarea proteinei p53 prin imunohistochimie in tumora nu reflectă starea mutației p53.
• Topoizomerazei-alfa. Este un obiectiv la care acțiunea este îndreptată antracicline - un medicament chimioterapeutic care este adesea utilizat în tratamentul cancerului de sân.